| 記錄編號 | 6333 |
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| 狀態 | NC094FJU00105033 |
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| 助教查核 | |
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| 索書號 | |
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| 學校名稱 | 輔仁大學 |
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| 系所名稱 | 生命科學系 |
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| 舊系所名稱 | |
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| 學號 | 492546240 |
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| 研究生(中) | 劉添富 |
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| 研究生(英) | Tien-Fu, Liu |
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| 論文名稱(中) | 過敏性鼻炎患者鼻沖洗液之蛋白質體學研究 |
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| 論文名稱(英) | Proteomic analysis of the nasal lavage fluid of the patients with allergic rhinitis |
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| 其他題名 | |
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| 指導教授(中) | 陳翰民 |
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| 指導教授(英) | Han-Min, Chen |
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| 校內全文開放日期 | |
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| 校外全文開放日期 | |
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| 全文不開放理由 | |
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| 電子全文送交國圖. | |
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| 國圖全文開放日期. | |
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| 檔案說明 | |
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| 電子全文 | |
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| 學位類別 | 碩士 |
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| 畢業學年度 | 94 |
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| 出版年 | |
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| 語文別 | 中文 |
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| 關鍵字(中) | 過敏性鼻炎, 蛋白質體學 |
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| 關鍵字(英) | |
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| 摘要(中) | 蛋白質體學是以生物體全體蛋白質， 以大尺度研究之一門學問 。主要利器為
二維電泳與質譜儀。 利用這兩種技術, 研究人員可以同時分離鑑定上千種樣品中之蛋白質。因此可稱之為高產量(high throughput)之方法，用於臨床研究，可以有效而且方便的找出致病相關之生物標的物(biomarkers)。本研究是利用蛋白質體學方法研究過敏性鼻炎患者之鼻沖洗液中之生物標的物，結果發現非過敏與過敏者存在有不同含量之 transferrin，antitrypsin， apo-a1，RNA binding protein, 以及PLUNC。 Transferrin，antitrypsin，apo-a1三者原是血液中固有之蛋白質，由於過敏發炎之故，使血管通透性增加，使物質外洩(extravasation)而致過敏發生之組織某物質含量增加。 至於 PLUNC，是呼吸道特有之表現蛋白質，其量增加於過敏之鼻腔，則顯示與疾病本身有關。因為其量，在二維電泳圖，免疫轉印西方墨點(western blot)，或ELISA，過敏組皆較非過敏組明顯。本研究之結論，過敏性鼻炎之鼻沖洗液中之total cell count, cell differential count 之eosinophil, basophil, mast cell, 都較非過敏高(P<0.05)。總蛋白質量(total proetin level), 過敏組也較非過敏高(P<0.05), 蛋白質標的物中之transferrin, antitrypsin, apo-a1, DJ-1(RNA binding protein), 與 PLUNC 都是過敏高於非過敏。因此，我們認為, 除了免疫學方面之研究, 本實驗或許提供過敏之另一項研究的方向。
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| 摘要(英) | Proteomics is a new technology for large scale of researching of proteins. Combination of
two-dimentional electrophoresis and mass spectrometry, researchers can separate and identify thousands of proteins simultaneously. Ｔherefore this high-throughput tech-
nique can be applied for clinical investigation. Fosearching the mechanism of a disease,
protein biomarkers is usually the final goal. Then combining 2-dimentional electrophoresis and mass spectrometry can find this goal effectively.
This study aimed to find the biomarkers of the nasal lavage fluids from the patients
with allergic rhinitis. We hope to study this disease by proteomics in addition of immu-
nologic methods.
The results here showed the significant differences among cell count, differential count(eosinophils, basophils, and mast cell), protein levels between allergic and non-
allergi groups. In addition , proteins of transferrin, antitrypsin,apo-a1, DJ-1, and
PLUNC were more prominent at allergic group than nonallergic group irrespective by
2-D electrophoresis, wesrtern blot or ELISA methods. Especially for PLUNC, a protein
restricted to the palate, lund clone, showed marked difference between allergic and non-
allergic group. It may express itself as a biomarker for the disease of respiratory tract, such as allergic arhinitis of this study. We hope to search this issue further mor
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| 論文目次 | 目 錄 I
謝誌 III
中文摘要 IV
英文摘要 1
第一章 概論 1
1.1 蛋白質體學的特色 2
1.1.1 以蛋白質為病徵標記物的優點 2
1.1.2 蛋白質體學相關技術具備高產出的特性 3
1.2 呼吸道表面液體(AIRWAY SURFACE LINING FLUID,ASL) 5
1.2.1 呼吸道表面液體是人體之一道防線 5
1.3 過敏性鼻炎簡介 6
1.3.1過敏性鼻炎的致病機轉與病理生理學 6
1.3.2 過敏性鼻炎之診斷 7
1.3.3 台灣過敏性鼻炎之流行病學 9
1.3.4 關於過敏性鼻炎之研究 10
1.4研究動機與目的 13
第二章 材料與方法 14
2.1 實驗對象 14
2.2 鼻腔沖洗術(NASAL LAVAGE NL) 14
2.3 鼻沖洗液(NASAL LAVAGE FLUID NLF) 之處理 14
2.4 蛋白質沉澱 14
2.5 蛋白質定量 17
2.6 離子交換法 19
2.7 SDS-PAGE 電泳 20
2.8 二維電泳 20
2.8.1第一次元電泳 (Isoelectric focusing, IEF) 20
2.8.2 IPG 膠體平衡反應 (IPG strip equilibration) 22
2.8.3第二次元電泳 24
2.9膠體染色 27
2.10 蛋白質免疫轉印法 31
2.10.1 蛋白質電泳轉印法 32
2.10.2 酵素免疫染色 33
2.11影像擷取與分析 35
2.12 蛋白脢水解 37
2.13 細胞素 IFN-Γ與 IL-4 之測定 40
第三章 實驗結果 42
3.1 鼻沖洗液胞學檢查結果(圖表一, 二) 42
3.2蛋白質沉澱結果(圖表五, 六) 42
3.3 SDS-PAGE 電泳結果 42
3.3.1 沈澱前樣本之電泳 42
3.3.2 離子交換後之電泳 43
3.3.3 沈澱後樣本之電泳 43
3.4 鼻沖洗液細胞素檢查結果(圖表三, 四) 43
3.5 二次元電泳 43
3.5.1 等電焦集法 (isoelectric focusing, IEF) 43
3.5.2 SDS-PAGE 電泳: 結果詳見圖? 44
3.6 質譜儀分析結果 44
3.7 WESTERN BLOT 結果 44
3.8 ELISA 結果 44
3.9 正常與過敏之比較 44
第四章 討論 45
第五章圖表集 49
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| 參考文獻 | 1. Chow L.P. Clinical and biochemical applications of proteomics research. Formosan J Med.2005 Vol.9 No.5: 628-636.
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| 論文頁數 | 88 |
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